从采血到抽干，代谢物提取这一流程看似复杂，但可以按照流程图来一步步完成。这次主要介绍三种样本采集方法：血液、整脑和脑片。血液样本方面，面静脉是多次采血的优选。麻醉后，小鼠侧仰，从耳根沿下颌骨下缘画两条延长线，交点就是进针点。用专用采血刀刺入1到2毫米，见血即成功。肝素化采血管收集2到3滴血液后，离心机分离血浆，再用MeOH重悬血细胞两次并弃去上清。整个过程都要在冰上进行。 整脑样本采集要注重断头、淋洗、称重这些步骤。首先将眼科剪、镊子和滴管预冷放入冰盒里泡着，再倒扣培养皿铺湿滤纸。麻醉后断头后把大脑放进装有0.9% NaCl的烧杯里冰浴15秒。用剥离子沿颅底挑起脑组织，分出大小脑并称重后直接放入–80℃保存或直接进入抽提环节。 新鲜脑切片样本采集的关键在于速冻与复温时间。这个过程与整脑样本类似，只不过还需要在冰冻切片机上切出80到150微米厚度的脑片。在体视镜下用预冷毛细管或SPT通针精准套取ROI区域。然后将脑片转移到1.5毫升离心管中保存或直接进入抽提环节。 接下来是代谢物抽提这一步骤。不管是血液样本还是脑组织样本，流程大致相同：先配制80% MeOH，电阻要大于等于18.2 MΩ；取出样品加入1毫升80% MeOH，血液直接剧涡1分钟，脑组织先碾磨至无阻力再涡旋；接着离心、取上清、取样、真空抽干；最后保存抽干后的黄色粉末–80℃待测。 这个流程围绕着两个铁律进行：保持上样量一致，给代谢物少点折腾。因为生物样本主要有DNA、RNA、蛋白和代谢物四大类，而代谢物定量最讲究上样量一致。整个操作都要在冰上快速进行，拒绝灌注这种方式。还有就是脑切片为什么要单独拎出来呢？这是因为整脑或小脑容易称重，但是一旦锁定到局部核团就很难保证体积了。通过脑切片可以统一厚度和面积，误差就被降到了最低。 除了血液、整脑和脑片外还有一些细节需要注意：每次操作都要确保电阻≥18.2 MΩ；真空抽干要在35℃ Speed Vac下进行约每小时200 μl；给每个样品加上1毫升80% MeOH；血液直接剧涡1分钟；脑片要先碾磨再涡旋；血浆取900 μl（90%），血细胞用1000 μl MeOH重悬后也取90%（400 μl）；最后得到的黄色粉末就是代谢物干粉了。 希望这个流程图能够帮助大家顺利完成实验！