嘿,给你推荐一个乳酸脱氢酶试剂盒吧。它是通过分光光度法进行测定的,每盒能做50管或者24个样本。正式开始前呢,得先选3个差异明显的样本做预测定,这样数据会更准确。Lactate Dehydrogenase,简称LDH,它的EC编号是1.1.1.27,广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞里。它是糖酵解途径里的关键酶,负责催化丙酮酸和乳酸之间的可逆反应,同时还涉及到NAD+和NADH的转换。 测定原理是这样的:LDH能把NAD+和乳酸变成丙酮酸,接着丙酮酸再和2,4-二硝基苯肼反应生成丙酮酸二硝基苯腙。这个产物在碱性溶液里会显棕红色,颜色越深说明丙酮酸越多。用这个试剂盒之前得准备好可见分光光度计、恒温水浴锅、离心机、移液器、玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 试剂盒的组分配方也比较简单:提取液30毫升一瓶放4度保存;试剂一15毫升一瓶4度保存;试剂二是粉剂一支-20度保存,用的时候加10微升试剂五和1.3毫升蒸馏水搅匀备用;试剂三15毫升一瓶4度保存;试剂四50毫升一瓶4度保存;试剂五100微升一支4度保存。 具体操作步骤分为前期准备、试剂配制、仪器参数设置、校准与质控、样本检测还有结果计算这几大步。先说说前期准备:看看试剂盒里的东西全不全有没有问题,从冰箱拿出来放在室温下平衡个把小时就行。样本要按要求处理好。仪器也得开机预热好,把反应杯和枪头这些耗材都准备好。 接下来是配试剂:有些直接用就行,有些得按比例混合。校准品也得按要求稀释好几个梯度备用。 然后是设置仪器参数:选终点法还是速率法都根据需要定。孵育温度通常是37度。主波长一般是450或者540纳米。 校准的时候得拿各浓度的校准品挨个测一遍吸光度值或者变化率,用Spline拟合或者线性回归画标准曲线。质控也要同时测高、中、低三个水平的样本看看符不符合要求。 测样本的时候按顺序加样就行:先加R1和样本孵育一会儿再把R2加进去。 最后计算结果的时候就用标准曲线对应一下浓度就出来了。记得记下来校准曲线的相关系数和质控结果这些信息哦。