磷酸盐缓冲液,英文名称Phosphate Buffer,简写为PB。这种缓冲液主要用磷酸二氢钠(NaH₂PO₄)和磷酸氢二钠(Na₂HPO₄)混合而成。这两种盐都是无机盐,结构简单且成本低廉,特别适合在生物实验室中使用。PB在pH 6.8到8.0之间拥有非常强的缓冲能力,因此很受生物学家青睐。许多实验中用的是0.1 mol/L、pH 7.2到7.4的配方,因为这个pH值和人体内环境接近,适合免疫组化(IHC)和组织切片等常见实验。 把PB制备出来的关键是调配这两种盐的比例。比如要配制pH 7.2的PB,就得把浓度更高的储备液(比如0.5 M)按28:72的比例混合。混合后还要用盐酸或氢氧化钠稍微调整一下pH值,最后加水定容到需要的体积。 PB之所以能维持稳定的pH值,是因为它利用了磷酸二氢根(H₂PO₄⁻)和磷酸氢根(HPO₄²⁻)之间的弱酸-弱碱平衡。当外界环境中的酸性或碱性物质进入时,这两种离子会互相转化来抵消冲击。 PB不仅用于免疫组化和组织切片,也常用在细胞培养里。在IHC实验中,PB常作为洗涤液或者封闭液使用。它的好处在于能保持稳定的pH环境,让抗体和抗原结合得更好。有些配方还去掉了氯化钠、钙离子和镁离子这些成分,这样就不容易产生沉淀物也减少了非特异性染色。 在切片过程中,PB也能帮大忙。它能维持恒定的pH值,让组织结构保持完整不变。如果不使用这种缓冲液,可能会因为pH波动导致组织降解。 0.1 mol/L、pH 7.2到7.4的PB因为配制方便、稳定性好,已经成了实验室里的基础试剂。不管是做IHC的洗涤还是切片的维持液,它都起着至关重要的作用。只要用对方法储存好它就能大大提高实验的可靠性。