今儿个跟您聊聊Hoechst 33258，这可是细胞核染色跟测细胞死了没的一把好手。这种蓝色荧光染料特喜欢往细胞里头钻，因为它对双链DNA亲和力高，跟腺嘌呤-胸腺嘧啶（A-T）这种小沟区域特别粘。虽然它自己荧光不咋亮，一沾DNA立马就能放出强光，最大激发波长在352或者346nm，发射在461或460nm。细胞要是要“去了”（凋亡），核膜变得松散，Hoechst进去得更利索，这时候的荧光就比健康细胞亮多了。 具体咋整呢？如果是测活细胞啥时候要死，就把Hoechst工作液按1:100的比例加进培养基里，轻轻吹打均匀了避光孵育个5到15分钟就行。这期间别晒着太阳，温度选室温还是37度看心情。洗完染完的残留染料（用PBS洗2-3次），在荧光显微镜下照一下紫外光看。健康细胞荧光一般比较暗，凋亡的那个蓝得很。 要是想看细胞核长啥样，那就得先把细胞给固定住。通常用4%多聚甲醛（PFA）固定个10到15分钟，然后用PBS把固定液洗掉两遍。接着把10微克/毫升的Hoechst工作液倒上去盖住样本，再孵育10分钟让染料好好结合DNA。吸掉染料再洗几遍就能在显微镜下观察细胞核的蓝莹莹的样子了。 Hoechst 33258能干的事儿不少。它最常用于看细胞啥时候要死了，毕竟凋亡的时候核膜破了个口子让它进去得更多。通过看荧光的亮暗就能快速分出谁是活人谁是死人。 再说说用它来分细胞处在啥周期里。搭配上流式细胞术（FACS），就能给一群细胞里的DNA含量算个账。因为处在G1期、S期还是G2/M期的DNA量不一样，Hoechst染出来的荧光强度也会跟着变。通过这个信号分布图就能知道这堆细胞到底都在哪个阶段待着呢。 看染色体的时候它也很有用。因为它对DNA很专一的这特性，用它能把染色体的长短形态看得清清楚楚。研究人员还会给它套个Giemsa染色之类的招式来帮忙。 最后说说它还能用在组织上。无论是石蜡切片还是冷冻切片都能搞定。它那水溶性强、信号亮的特点让它成了病理科跟组织学研究的好帮手。拿它去染组织切片就能看清里面的细胞核分布得好不好、形态正不正常、密度高不高，这对研究肿瘤或者发育啥的都很有参考价值。