AF514 NHS酯这种试剂，是用绿色偏黄的荧光染料AF514做成的活性酯衍生物。它最厉害的地方，是能和带有氨基的物质快速结合，形成稳定的键。这种活性酯反应效率高，耐光能力强，特别适合用来给高分子或者聚合物做表面改性，或者在多功能小分子里进行共价连接。AF514的发射波长夹在Alexa Fluor 488和532中间，刚好能在多通道荧光实验里再添一个信号，避免信号混杂。它的设计也很巧妙，中间是稳定发光的染料部分，两头接的是能跟氨基反应的NHS活性酯。把它连接到目标分子或者材料表面后，荧光团不会干扰主链功能，也不容易被周围的物质猝灭掉。研究者常用它在功能聚合物薄膜或者纳米颗粒上做标记，因为它发黄绿色的光，正好能弥补绿色通道饱和或者需要区分488通道的情况。 具体操作时，通常把它和带氨基的材料放在有机溶剂或者缓冲液里，把pH值调到7到8之间，让NHS端和氨基高效结合。反应完后用透析或者柱层析把没用的东西去掉，保证标记的纯度和均一性。储存方面，要避光放在低温干燥的地方。它在水里的溶解性还行，适合在缓冲液里用，而且荧光亮度很高，对比度好。这种标记手段让多通道荧光实验变得更灵活，也给那些复杂的多功能体系提供了可靠的信号区分方法。 下面这些试剂也很有用：Alkyne-PEG2k-aldehyde这种炔基聚乙二醇衍生物能接醛基；CY5-PEG2k-OH是羟基修饰的CY5；CY7-PEG2K-Hydroxyl是带羟基的近红外荧光CY7；CY7-PEG2k-Thiol也就是CY7-PEG-SH是带巯基的近红外荧光染料；C18-PEG-Biotin能把十八烷基链连上生物素；C18-PEG2k-Rhodamine可以接上罗丹明；C18-PEG-OPSS是带巯基吡啶的十八烷基聚乙二醇；CY3-PEG5k-C18和CY5-PEG2k-C18都是十八烷基修饰的CY3和CY5。